1991年，17岁的蔡少芬参加香港小姐竞选获得季军后并与香港电视广播有限公司签约从而出道。1994年出演古装电影《九品芝麻官之白面包青天》，1995年出演经典无厘头电影《大话西游之月光宝盒》。1998年凭借《妙手仁心》荣获万千星辉颁奖典礼最佳女主角。2000年，与宣萱、陈慧珊、郭可盈被称为为TVB“四大花旦”。蔡少芬2008年与张晋结婚，并于2011和2013年生下两个女儿。2014年3月25日，蔡少芬获得电视世界英艺奖。