2004年被徐克导演选中出演由其监制的电视剧《七剑下天山》而出道。2009年因在古装大戏《美人心计》中一人出色分饰三个性格迥异的角色而获得业界和观众的一致好评。2012年在电视剧《北京青年》中颠覆形象饰演精神病患者任知了让其人气剧增。2013年参加真人秀节目《星跳水立方》获封“素颜女神”。2014年，参演电影《前任攻略》。2015年，主演徐静蕾执导的电影《有一个地方只有我们知道》，并获得第22届北京大学生电影节最受欢迎女演员奖；同年登上中央电视台元宵晚会表演舞蹈节目《国色天香》。
王丽坤出演该片蜘蛛精戚秦氏一角，从前期柔柔弱弱、楚楚可怜的弱女子转变为后期震撼人心的魅惑蜘蛛精，角色性感妩媚彻底颠覆其以往清新素雅的大众形象，玩转反差感。据悉，王丽坤版戚秦氏在片中与唐僧师徒四人关系错综复杂，在撩与被撩之间不断转换，看点多多。
昨日，由周星驰和徐克联手打造的电影《西游伏妖篇》曝光了一版“有妖气”制作特辑。片中，王丽坤饰演的戚秦氏首度揭开神秘面纱，从柔柔弱弱的正气少女到性感妩媚的长腿妖精，两种风格无缝隙衔接切换自如，获得周星驰、徐克的一致肯定。
